如何區(qū)別激發(fā)光光譜儀和熒光光譜儀?
點擊次數:3045 更新時間:2019-03-26
熒光光譜儀是一種定性、定量分析的儀器。通過熒光光譜儀的檢測,可以獲得物質的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產率、熒光強度、熒光壽命、斯托克斯位移、熒光偏振與去偏振特性,以及熒光的淬滅方面的信息。是研究藥物與蛋白質相互作用的常用儀器。藥物與蛋白質相互作用后可能引起藥物自身熒光光譜和蛋白質自身熒光(內源熒光)光譜以及同步熒光光譜的變化,如熒光強度和偏振度的改變、新熒光峰的出現等,這些均可以提供藥物與蛋白質結合的信息。
如何區(qū)別激發(fā)光光譜儀和熒光光譜儀?熒光往往很弱,如果不把它從激發(fā)光里分離出來,它會被激發(fā)光淹沒。熒光測量系統,通常用以下一種或幾種方法來分離熒光:
1、90°布置法:激發(fā)光和探測器90°方向布置。由于熒光沒有方向性,它向四周發(fā)射,因此可以把探測器放在與激發(fā)光成90°的位置來接收熒光。大部分的熒光測量裝置都采用此方法(同時常常配上其它方法)。
2、時間延遲法:由產生熒光的原理可知,熒光從產生到消失,它有一個時間過程(即從高能級的非穩(wěn)態(tài)躍遷到低能級的亞穩(wěn)態(tài)或穩(wěn)態(tài)的時間)。不同的物質,這個時間的長短是不一樣的,它們從幾微秒到幾分鐘不等。我們可以給探測器的快門一個延遲時間,讓激發(fā)光消失后開始對熒光采樣。在一些特殊條件,如用反射探針測固體、液體的熒光時,光路無法90°布置,這時需要通過延遲采樣時間來分離出熒光。
3、濾波法:從熒光光譜儀產生原理可知,熒光的波長大于激發(fā)光的波長。我們在探測器前面放一個長通濾波片,它的截至波長稍大于激發(fā)光波長。這樣,只有熒光才能被探測器采集。該法的另一個好處是可以慮掉一部分雜散光,但是它也可能慮掉一部分熒光。